招标货物一览表
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合同包 |
品目号 |
货物名称 |
技术指标及其他要求 |
规格 |
数量（盒） |
最高控制价 |
交货期 |
交货地点 |
付款方式 |
|
1 |
1 |
猪瘟荧光RT-PCR试剂盒 |
详见附件 |
48头份/盒 |
5 |
7.2万元 |
按业主指定时间 |
按业主指定地点 |
货到验收完毕，一个月后一次性支付 |
|
2 |
高致病性猪蓝耳病荧光RT-PCR试剂盒 |
48头份/盒 |
2 |
|
3 |
伪狂犬病病毒荧光PCR试剂盒 |
48头份/盒 |
5 |
|
4 |
禽流感A型荧光RT-PCR试剂盒 |
48头份/盒 |
15 |
|
5 |
禽流感H5荧光RT-PCR试剂盒 |
48头份/盒 |
5 |
|
2 |
1 |
猪瘟抗体Elisa |
详见附件 |
480头份/盒 |
2 |
6.25万元 |
按业主指定时间 |
按业主指定地点 |
货到验收完毕，一个月后一次性支付 |
|
2 |
口蹄疫抗体Elisa |
480头份/盒 |
2 |
|
3 |
高致病性猪蓝耳病抗体Elisa |
480头份/盒 |
2 |
|
4 |
口蹄疫亚1型液相阻断Elisa |
200头份/盒 |
2 |
|
3 |
1 |
禽流感H5亚型抗原 |
详见附件 |
2mL/瓶 |
20 |
6.5万元 |
按业主指定时间 |
按业主指定地点 |
货到验收完毕，一个月后一次性支付 |
|
2 |
禽传染性贫血病抗体Elisa |
480头份/盒 |
1 |
|
3 |
禽白血病抗体Elisa |
480头份/盒 |
1 |
|
4 |
禽网状内皮组织增生症Elisa |
480头份/盒 |
1 |
|
5 |
蓝舌病抗体Elisa |
480头份/盒 |
1 |
|
6 |
禽流感A型RT-PCR |
50头份/盒 |
2 |
|
7 |
禽流感H9型普通 RT-PCR |
50头份/盒 |
2 |
|
8 |
禽流感H5亚型RT-PCR |
50头份/盒 |
2 |
|
9 |
ND普通RT-PCR |
50头份/盒 |
2 |
附件：
包1要求：
一、 禽流感病毒通用型荧光定量RT-PCR
*禽流感病毒通用型荧光定量RT-PCR检测试剂盒可用于检测所有15个亚型的A型流感病毒。
*操作过程符合GB/T 19438.1-2004《禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法》。
（一）试剂构成
试剂盒组成包括应核酸扩增试剂及阴性对照和阳性对照，具体成分参见表一。
*核酸扩增采用了一步法RT-PCR。
阳性对照采用体外反转录RNA。
表一：试剂盒组成（48头份/盒）
|
组成成份 |
体积 |
|
核酸扩增试剂 |
|
|
DEPC水 |
1ml×1管 |
|
RT-PCR反应液 |
750uL×1管 |
|
*RT-PCR酶（带盖PCR反应管装）（Promega固体酶） |
1颗/管×12管 |
|
Taq酶（5U/uL） |
12uL×1管 |
|
对照品 |
|
|
阴性对照 |
1ml×1管 |
|
阳性对照（非感染性体外转录RNA） |
1ml×1管 |
试剂盒可用于几乎所有禽类相关样品的检测：包括肌肉组织、脏器、咽喉拭子、泄殖腔拭子、血清或血浆等。
（二）体系扩增
1 扩增试剂准备（PCR前准备区）
从试剂盒中取出相应的RT-PCR反应液、Taq酶，在室温下融化后，2,000rpm离心5sec。设所需PCR数为n（n = 样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照），每个测试反应体系配制如下表：
|
试 剂 |
RT-PCR反应液 |
Taq酶 |
|
用 量 |
15 uL |
0.25 uL |
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积试管中，向其中加入n/4颗RT-PCR酶颗粒，充分混合均匀，向每个PCR管中各分装15uL，转移至样本处理区。
2 加样（样本处理区）
在各设定的PCR管中分别加入上述样本处理步骤6.8.中制备的RNA溶液各10uL，盖紧管盖，放入荧光 PCR荧光检测仪内，记录样本摆放顺序。
3 RT-PCR反应（检测区）
3.1 循环条件设置
|
Program |
cycles |
Temperature (℃) |
Incubation
Time(min:sec) |
Acquisiton
Mode |
|
1 |
1 |
42 |
30:00 |
None |
|
2 |
1 |
92 |
3:00 |
None |
|
3 |
5 |
92 |
10 |
None |
|
45 |
30 |
None |
|
72 |
1:00 |
None |
|
|
40 |
|
10 |
None |
|
60 |
30 |
收集荧光 |
|
5 |
1 |
40 |
0 |
None |
3.2 仪器检测通道选择FAM通道。
4 结果分析条件设定
读取F1通道的检测结果。阈值设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照品扩增曲线的最高点，结果显示阴性为准。或可根据仪器噪音情况进行调整。
5 质控标准
5.1 阴性对照的检测结果为阴性。
5.2 阳性对照的Ct值应小于等于28.0。否则，此次实验视为无效。
6 结果判断
6.1 Ct值无数值的样本为阴性样本。
6.2 Ct值≤30.0的样本为阳性。
6.3 Ct值大于30.0的样本建议重做。重做结果无数值者为阴性，否则为阳性。
二、 禽流感病毒H5亚型荧光定量RT-PCR
*禽流感病毒H5亚型荧光定量RT-PCR检测试剂盒可用于检测H5亚型的禽流感病毒。
*操作过程符合GB/T 19438.2-2004《H5亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》。
（一）试剂构成
试剂盒组成包括应核酸扩增试剂及阴性对照和阳性对照，具体成分参见表一。
*核酸扩增采用了一步法RT-PCR。
阳性对照采用体外反转录RNA。
表一：试剂盒组成（48头份/盒）
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组成成份 |
体积 |
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核酸扩增试剂 |
|
|
DEPC水 |
1ml×1管 |
|
RT-PCR反应液 |
750uL×1管 |
|
*RT-PCR酶（带盖PCR反应管装）（Promega固体酶） |
1颗/管×12管 |
|
Taq酶（5U/uL） |
12uL×1管 |
|
对照品 |
|
|
阴性对照 |
1ml×1管 |
|
阳性对照（非感染性体外转录RNA） |
1ml×1管 |
试剂盒可用于几乎所有禽类相关样品的检测：包括肌肉组织、脏器、咽喉拭子、泄殖腔拭子、血清或血浆等。
（二）体系扩增
1 扩增试剂准备（PCR前准备区）
从试剂盒中取出相应的RT-PCR反应液、Taq酶，在室温下融化后，2,000rpm离心5sec。设所需PCR数为n（n = 样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照），每个测试反应体系配制如下表：
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试 剂 |
RT-PCR反应液 |
Taq酶 |
|
用 量 |
15 uL |
0.25 uL |
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积试管中，向其中加入n/4颗RT-PCR酶颗粒，充分混合均匀，向每个PCR管中各分装15uL，转移至样本处理区。
2 加样（样本处理区）
在各设定的PCR管中分别加入上述样本处理步骤6.8.中制备的RNA溶液各10uL，盖紧管盖，放入荧光 PCR荧光检测仪内，记录样本摆放顺序。
3 RT-PCR反应（检测区）
3.1 循环条件设置
|
Program |
cycles |
Temperature (℃) |
Incubation
Time(min:sec) |
Acquisiton
Mode |
|
1 |
1 |
42 |
30:00 |
None |
|
2 |
1 |
92 |
3:00 |
None |
|
3 |
5 |
92 |
10 |
None |
|
45 |
30 |
None |
|
72 |
1:00 |
None |
|
|
40 |
|
10 |
None |
|
60 |
30 |
收集荧光 |
|
5 |
1 |
40 |
0 |
None |
3.2 仪器检测通道选择FAM通道。
4 结果分析条件设定
读取F1通道的检测结果。阈值设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照品扩增曲线的最高点，结果显示阴性为准。或可根据仪器噪音情况进行调整。
5 质控标准
5.1 阴性对照的检测结果为阴性。
5.2 阳性对照的Ct值应小于等于28.0。否则，此次实验视为无效。
6 结果判断
6.1 Ct值无数值的样本为阴性样本。
6.2 Ct值≤30.0的样本为阳性。
6.3 Ct值大于30.0的样本建议重做。重做结果无数值者为阴性，否则为阳性。
三、 猪瘟病毒荧光定量RT-PCR
*猪瘟荧光定量RT-PCR检测试剂盒可用于检测猪瘟病毒。
（一）试剂构成
试剂盒组成包括应核酸扩增试剂及阴性对照和阳性对照，具体成分参见表一。
*核酸扩增采用了一步法RT-PCR。
阳性对照采用体外反转录RNA。
表一：试剂盒组成（48头份/盒）
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组成成份 |
体积 |
|
核酸扩增试剂 |
|
|
DEPC水 |
1ml×1管 |
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RT-PCR反应液 |
750uL×1管 |
|
*RT-PCR酶（带盖PCR反应管装）（Promega固体酶） |
1颗/管×12管 |
|
Taq酶（5U/uL） |
12uL×1管 |
|
对照品 |
|
|
阴性对照 |
1ml×1管 |
|
阳性对照（非感染性体外转录RNA） |
1ml×1管 |
试剂盒可用于几乎所有畜类相关样品的检测：包括肌肉组织、脏器、血清或血浆等。
（二）体系扩增
1 扩增试剂准备（PCR前准备区）
从试剂盒中取出相应的RT-PCR反应液、Taq酶，在室温下融化后，2,000rpm离心5sec。设所需PCR数为n（n = 样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照），每个测试反应体系配制如下表：
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试 剂 |
RT-PCR反应液 |
Taq酶 |
|
用 量 |
15 uL |
0.25 uL |
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积试管中，向其中加入n/4颗RT-PCR酶颗粒，充分混合均匀，向每个PCR管中各分装15uL，转移至样本处理区。
2 加样（样本处理区）
在各设定的PCR管中分别加入上述样本处理步骤6.8.中制备的RNA溶液各10uL，盖紧管盖，放入荧光 PCR荧光检测仪内，记录样本摆放顺序。
3 RT-PCR反应（检测区）
3.1 循环条件设置
|
Program |
cycles |
Temperature (℃) |
Incubation
Time(min:sec) |
Acquisiton
Mode |
|
1 |
1 |
42 |
30:00 |
None |
|
2 |
1 |
92 |
3:00 |
None |
|
3 |
5 |
92 |
10 |
None |
|
45 |
30 |
None |
|
72 |
1:00 |
None |
|
|
40 |
|
10 |
None |
|
60 |
30 |
收集荧光 |
|
5 |
1 |
40 |
0 |
None |
3.2 仪器检测通道选择FAM通道。
4 结果分析条件设定
读取F1通道的检测结果。阈值设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照品扩增曲线的最高点，结果显示阴性为准。或可根据仪器噪音情况进行调整。
5 质控标准
5.1 阴性对照的检测结果为阴性。
5.2 阳性对照的Ct值应小于等于28.0。否则，此次实验视为无效。
6 结果判断
6.1 Ct值无数值的样本为阴性样本。
6.2 Ct值≤30.0的样本为阳性。
6.3 Ct值大于30.0的样本建议重做。重做结果无数值者为阴性，否则为阳性。
四、高致病性猪蓝耳病病毒荧光定量RT-PCR
*高致病性猪蓝耳病荧光定量RT-PCR检测试剂盒可用于检测高致病性猪蓝耳病病毒。
（一）试剂构成
试剂盒组成包括应核酸扩增试剂及阴性对照和阳性对照，具体成分参见表一。
*核酸扩增采用了一步法RT-PCR。
阳性对照采用体外反转录RNA。
表一：试剂盒组成（48头份/盒）
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组成成份 |
体积 |
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核酸扩增试剂 |
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|
DEPC水 |
1ml×1管 |
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RT-PCR反应液 |
750uL×1管 |
|
*RT-PCR酶（带盖PCR反应管装）（Promega固体酶） |
1颗/管×12管 |
|
Taq酶（5U/uL） |
12uL×1管 |
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对照品 |
|
|
阴性对照 |
1ml×1管 |
|
阳性对照（非感染性体外转录RNA） |
1ml×1管 |
试剂盒可用于几乎所有畜类相关样品的检测：包括肌肉组织、脏器、血清或血浆等。
（二）体系扩增
1 扩增试剂准备（PCR前准备区）
从试剂盒中取出相应的RT-PCR反应液、Taq酶，在室温下融化后，2,000rpm离心5sec。设所需PCR数为n（n = 样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照），每个测试反应体系配制如下表：
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试 剂 |
RT-PCR反应液 |
Taq酶 |
|
用 量 |
15 uL |
0.25 uL |
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积试管中，向其中加入n/4颗RT-PCR酶颗粒，充分混合均匀，向每个PCR管中各分装15uL，转移至样本处理区。
2 加样（样本处理区）
在各设定的PCR管中分别加入上述样本处理步骤6.8.中制备的RNA溶液各10uL，盖紧管盖，放入荧光 PCR荧光检测仪内，记录样本摆放顺序。
3 RT-PCR反应（检测区）
3.1 循环条件设置
|
Program |
cycles |
Temperature (℃) |
Incubation
Time(min:sec) |
Acquisiton
Mode |
|
1 |
1 |
42 |
30:00 |
None |
|
2 |
1 |
92 |
3:00 |
None |
|
3 |
5 |
92 |
10 |
None |
|
45 |
30 |
None |
|
72 |
1:00 |
None |
|
|
40 |
|
10 |
None |
|
60 |
30 |
收集荧光 |
|
5 |
1 |
40 |
0 |
None |
3.2 仪器检测通道选择FAM通道。
4 结果分析条件设定
读取F1通道的检测结果。阈值设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照品扩增曲线的最高点，结果显示阴性为准。或可根据仪器噪音情况进行调整。
5 质控标准
5.1 阴性对照的检测结果为阴性。
5.2 阳性对照的Ct值应小于等于28.0。否则，此次实验视为无效。
6 结果判断
6.1 Ct值无数值的样本为阴性样本。
6.2 Ct值≤30.0的样本为阳性。
6.3 Ct值大于30.0的样本建议重做。重做结果无数值者为阴性，否则为阳性。
五、伪狂犬病病毒荧光PCR试剂盒
伪狂犬病病毒荧光PCR试剂盒可用于检测猪伪狂犬病病毒。
（一）试剂构成
*试剂盒组成包括应核酸扩增试剂及阴性对照和阳性对照，具体成分参见表一。
表一：试剂盒组成（48头份/盒）
|
组成成份 |
体积 |
|
核酸扩增试剂 |
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DEPC水 |
1ml×1管 |
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PCR反应液 |
750uL×1管 |
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Taq酶（5U/uL） |
12uL×1管 |
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对照品 |
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阴性对照 |
1ml×1管 |
|
阳性对照 |
1ml×1管 |
试剂盒可用于几乎所有畜类相关样品的检测：包括肌肉组织、脏器、血清或血浆等。
（二）体系扩增
1 扩增试剂准备（PCR前准备区）
从试剂盒中取出相应的RT-PCR反应液、Taq酶，在室温下融化后，2,000rpm离心5sec。设所需PCR数为n（n = 样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照），每个测试反应体系配制如下表：
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试 剂 |
RT-PCR反应液 |
Taq酶 |
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用 量 |
15 uL |
0.25 uL |
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积试管中，向其中加入n/4颗RT-PCR酶颗粒，充分混合均匀，向每个PCR管中各分装15uL，转移至样本处理区。
2 加样（样本处理区）
在各设定的PCR管中分别加入上述样本处理步骤6.8.中制备的RNA溶液各10uL，盖紧管盖，放入荧光 PCR荧光检测仪内，记录样本摆放顺序。
3 RT-PCR反应（检测区）
3.1 循环条件设置
|
Program |
cycles |
Temperature (℃) |
Incubation
Time(min:sec) |
Acquisiton
Mode |
|
1 |
1 |
42 |
30:00 |
None |
|
2 |
1 |
92 |
3:00 |
None |
|
3 |
5 |
92 |
10 |
None |
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45 |
30 |
None |
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72 |
1:00 |
None |
|
|
40 |
|
10 |
None |
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60 |
30 |
收集荧光 |
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5 |
1 |
40 |
0 |
None |
3.2 仪器检测通道选择FAM通道。
4 结果分析条件设定
读取F1通道的检测结果。阈值设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照品扩增曲线的最高点，结果显示阴性为准。或可根据仪器噪音情况进行调整。
5 质控标准
5.1 阴性对照的检测结果为阴性。
5.2 阳性对照的Ct值应小于等于28.0。否则，此次实验视为无效。
6 结果判断
6.1 Ct值无数值的样本为阴性样本。
6.2 Ct值≤30.0的样本为阳性。
6.3 Ct值大于30.0的样本建议重做。重做结果无数值者为阴性，否则为阳性。
*包1规格、贮藏及有效期
试剂盒应-20℃保存，到用户手上有效期应≥9个月。
包2要求
一、猪瘟病毒(CSFV-Ab)抗体ELISA检测试剂盒
*（一）检测目的：检测抗猪瘟病毒抗体
*（二）检测方法：应用多重诱捕阻断ELISA技术，结合使用了CSFV E2抗原和单克隆抗体。用于检测和评估猪群免疫后CSFV中和抗体水平。
（三）试验原理：
猪瘟病毒抗体阻断ELISA是将经过免疫亲和技术纯化的重组E2糖蛋白包被在酶标板上，如果样品中存在抗E2糖蛋白的抗体，那么在加入辣根过氧化物酶结合的抗E2糖蛋白单克隆抗体以及显色底物后，颜色将不会加深。颜色的OD值和血清样品中抗E2糖蛋白特异抗体的量呈负相关。样品的OD值同阳性对照以及阴性对照比较后得到血清样品中抗体的百分比值。
*（四）、特点：
同NPLA比较： 敏感度≥97.7%，特异性≥99.2%
*（五）、试剂盒内容：
1、CSFV E2糖蛋白包被板 5块
2、10倍洗液 200毫升
3、血清稀释液 50毫升
4、酶结合抗体 50毫升
5、阳性血清对照 0.6毫升
6、阴性血清对照 0.6毫升
7、显色底物 60毫升
8、终止液 30毫升
（六）、操作步骤：
1、实验前的准备及加样
①使用前所有试剂盒组都必须恢复到室温（18℃-25℃），试剂应轻轻旋转或振荡均匀。
②将10洗液进行10倍稀释
③取出抗原反应板，在记录表上记录阴阳对照，样品的位置。
④分别在每孔加人50μl稀释液，然后加阳性和阴性对照，待检血清各50μl，贴上封板膜，置37℃孵育1小时，或室温（15-27℃）过夜。
2、洗板及加试剂
①小心揭掉封板膜，弃去各孔中液体，拍净。每孔加满洗液300μl，洗3次，最后在吸水纸上拍净。
②每孔加入酶结合物100μl，置室温孵育30分钟。
③重复①.
④每孔加入底物100μl，置室温孵育15分钟.
3、读数
每孔加入终止液50μl，轻振混匀，置酶标仪450 nm波长处测定各孔OD450值.
（七）、结果判定
1、试验结果同时符合下列条件，方为有效：
阴性值＞0.5
阳性值＜0.2
2、判定标准：
①样品竞争值的计算方程式：
样品竞争值（%PC）=【（阴性OD值-样品OD值）/（阴性OD值-阳性OD值）】×100
②竞争值＜40判为阴性；没有保护力；
竞争值≥40判为阳性；
③ 如果结果可疑，检查样品有无污染或者重检；
④ 如果重检结果依然可疑，应结合猪场流行病学情况，重新采样并检测。
二、口蹄疫病毒O型（FMDV-O）抗体检测试剂盒
*（一）检测目的：检测抗口蹄疫病毒O型抗体
*（二）检测方法：阻断ELISA，检测O型中和抗体，用重组FMDV rP13C蛋白粒子包被，抗VP1蛋白A位点单抗为酶标抗体。在免疫地区能够用来做抗体监测和免疫效果评估。适用对象包括猪、牛、山羊以及绵羊等。
（三）试剂盒组成：
1、FMDV O型rP13C蛋白包被板 5块
2、10倍洗液 200毫升
3、样品稀释液 50毫升
4、HRPO酶标抗体 50毫升
5、阳性血清对照 &n, bsp; 0.5毫升
6、阴性血清对照 0.5毫升
7、TMB底物液 60毫升
8、终止液 30毫升
（四）注意事项：
1、使用之前请仔细阅读使用说和操作明；
2、试剂盒储存条件：2-8℃；
（五）实验前准备：
1、 洗液10倍稀释：如20ml洗液，加入180ml去离子水混匀，备用。
2、 TMB底物：使用前恢复到室温，因为低温可能导致不显色。
（六）操作步骤：
1、 使用前将试剂盒所有组件恢复到室温，取出抗原包被板；
2、 标记好样品、阳性对照和阴性对照，每孔加入样品稀释液80uL，然后加入样品血清、阳性对照、阴性对照各20uL；
3、 室温孵育60分钟；
4、 洗板：每孔加入洗涤液300uL ，洗涤3次，最后在吸水纸上拍干；
5、 每孔加入100uL酶标抗体，室温孵育60分钟；
6、 重复步骤4，洗涤3次；
7、 每孔加入TMB底物反应液100uL，室温暗处放置15分钟；
（七）读数：
每孔加入50uL终止液，在酶标仪450nm波长处读数。
（八）结果判定：
1、实验有效性判定
阴性对照OD值≥0.6
阳性对照OD值≤0.3
2、判定标准：
① SN值的计算方程式：
SN=【样品值/阴性值】
SN值≤0.60 判为阳性；
SN值＞0.60 判为阴性；
注：如果检测结果可疑，对样品进行再次检测；
三、高致病性猪蓝耳病抗体检测试剂盒
*（一）检测目的：
检测高致病性猪蓝耳病抗体
*（二）检测方法：
间接ELISA
*（三）、试剂盒内容：
酶标板5块
洗液*10：250mL
样本稀释液*3：100mL
酶标复合物：30mL
底物：30mL
终止液：30mL
阳性对照：2.2ml
阴性对照：2.2ml
盖膜：10块
（四）、操作步骤：
所有试剂回到室温
阴阳性对照不要稀释，样品要进行200倍稀释。、
阴阳性对照必须是双孔。
加50uL阳性对照、阴性对照、及稀释的样品到反应板中。
盖膜，37℃作用60分钟
去膜，用300uL洗液洗涤3遍，拍干
在每个孔中加入50uL酶标抗体。
盖膜，37℃作用60分钟。
去掉膜，用洗液（300uL）洗3次，拍干。
加入50uL底物，20-25℃作用10分钟。
加入50uL终止液，混匀。
10-15分钟之内在450nm下读数并记录结果。
（五）、结果判定
阳性对照平均值OD应大于0.6，且阳性对照/阴性对照平均值大于4.0
结果用IRCP表示：
四、口蹄疫亚1型液相阻断抗体检测试剂盒
*（一）检测目的：
检测口蹄疫亚1型抗体
*（二）检测方法：
液相阻断ELISA
*（三）操作步骤：
1. ELISA板包被
用包被缓冲液稀释口蹄疫病毒兔抗血清（保存于-20℃）至工作浓度（1:1000），在ELISA板（试剂盒内的塑料平底板）上每孔加入50 uL，振荡，封板或置湿盒内，室温过夜。
2. 待检血清包被
根据下图的布局，在U型反应板上（试剂盒内的塑料Ｕ型板）进行如下操作。
（1）待检血清加样
①A1-A10（第一行）和E1-E10（第五行），每孔加入94.75 uL PBST溶液；1-10列的其他孔加入50 uL/孔 PBST溶液；
②A1-A10（第一行）和E1-E10（第五行），每孔加入6.25 uL待检血清，并以50 uL的量往本列的下方做倍比稀释；A1稀释至D1，A2稀释至D2，E1稀释至H1，以此类推；
（2）阳性对照血清加样
①Ａ11加入75 uL PBST，B11-H11加入50 uL PBST；
②A11加入25 uL阳性对照血清（试剂盒配有，出厂浓度为1:23），以50 uL倍比稀释至H11；
（3）阴性对照血清加样
①A12、B12孔加入50 uL/孔 PBST；
②A12加入50 uL阴性对照血清，50 uL倍比稀释至B12；（4）加病毒抗原
①从-20℃取出口蹄疫病毒抗原；
②确认口蹄疫病毒抗原（5 mL/瓶）、试剂盒外包装和试剂盒内说明书，三者的生产批号必须一致；
③口蹄疫病毒抗原融化摇匀，按试剂盒说明书的比例，用PBST进行稀释，摇匀后倒入V型槽；
④U型板中加入稀释后的病毒抗原50 uL/孔；
⑤E12-H12每孔继续补加稀释后的病毒抗原50 uL/孔；
（5）振荡摇匀，标记板号，封板，4℃过夜。
3. U型板液体转移到ELISA板
（1）用PBST洗ELISA板5次，在吸水纸上拍干；
（2）从U型板中按顺序依次转移到ELISA板中，每孔50 uL；
（3）在ELISA板上誊抄U型板板号，封板，37℃孵育1小时；
4. 加口蹄疫病毒豚鼠抗血清
（1）用PBST洗ELISA板5次，在吸水纸上拍干；
（2）用豚鼠抗血清稀释液，稀释口蹄疫病毒豚鼠抗血清，至工作浓度（见口蹄疫病毒豚鼠抗血清管壁）；
（3）ELISA板中加入稀释后的口蹄疫病毒豚鼠抗血清，50 uL/孔；
（4）封板，37℃孵育1小时；
5. 加兔抗豚鼠酶结合物
（1）用PBST洗ELISA板5次，在吸水纸上拍干；
（2）用PBST稀释兔抗豚鼠酶结合物，至工作浓度（1:500），50 uL/孔；
（3）封板，37℃孵育1小时；
6. 显色反应
（1）用PBST洗ELISA板5次，在吸水纸上拍干；
（2）每孔加入50 uL底物溶液（务必加双氧水！），
（3）37℃孵育15分钟；
7. 终止反应，读数
每孔加入50 uL终止液，立即在492 nm波长下读取OD值。
8. 计算临界值
抗原对照孔为E12-H12，共4孔。弃去OD值最高和最低的2孔，计算剩余2孔德平均OD值，再除以2，即50%对照值。
该值即为临界值，表示阻断50%反应的对照OD值。
9. 效价的计算方法
以临界值为尺度，度量每份样品OD值的变化。每份样品，孔OD值=临界值时，所在孔的稀释度，即为样品的抗体滴度。
若临界值处于两个稀释孔的OD值之间，则取这两孔滴度的中间值。如位于孔1:25和孔1:26之间，则滴度为1:25.5。
10. 试验有效性验证
4孔抗原对照孔，OD值必须在1.0-2.0之间；
阳性对照血清抗体效价应在1:29-1:210；
阴性对照血清抗体效价应小于1:23；
11. 结果判定
具体动物、具体口蹄疫血清型抗体的阳性判定标准，根据国家当年相关标准执行。
*包2规格、贮藏及有效期
试剂盒应4℃保存，到用户手上有效期应≥6个月（液相阻断有效期应≥4个月）。
包3内容：
一、H5亚型抗原血凝抗原
【主要成分与含量】 抗原为灭活的H5亚型禽流感病毒，血凝效价≥7log2。阳性血清为SPF鸡感染禽流感病毒H5亚型制备的高免血清，HI效价≥7log2。阴性血清为SPF鸡血清。
【性状】 抗原为白色或淡黄色海绵状疏松团块；阳性血清和阴性血清为微黄色或淡红色海绵状疏松团块。易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。
【作用与用途】 用于HI试验检测禽流感病毒H5亚型抗体。
【用法与判定】
1 材料
1.1 96孔V型(90度)微量反应板、单道及多道微量移液器（配有吸头）、加样槽、吸管、烧杯等。
1.2 pH值7.2 0.01mol/L PBS
1.2.1 配制25倍PB 称量2.74g Na2HPO4 和0.79g NaH2PO。H2O，加蒸馏水至100mL；
1.2.2 配制1倍PBS 量取40ml 25倍PB，加入8.5g NaCl，加蒸馏水至1000mL；
1.2.3 用NaOH或HCl调pH值至7.2；
1.2.4 69Kpa 15min高压灭菌或用微孔滤膜过滤除菌。
1.2.5 PBS一经使用，于2～8℃保存不超过3周。
1.3 阿氏（Alsevers）液 称葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100mL，加热溶解后调pH值至6.1，69Kpa 15min高压灭菌，2～8℃保存备用。
1.4 1%鸡红细胞悬液 采集2～3只SPF公鸡或无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡的血液与等体积阿氏液混合，用pH值7.2 0.01mol/L PBS液洗涤3次，每次均以3000rpm/min离心5min，洗涤后用PBS配成1%（V/V）红细胞悬液，2～8℃保存备用。
1.5 抗原溶解 冻干的抗原和血清均按瓶签上规格标注的量，用PBS溶解。
2 操作术式
2.1 血凝（HA）试验
2.1.1 在V型微量反应板中，每孔加0.025ml PBS。
2.1.2 第l孔加0.025ml抗原，反复抽打3～5次混匀。
2.1.3 从第1孔吸取0.025ml抗原加入第2孔，混匀后吸取0.025ml加入第3孔，如此进行对倍稀释至第11孔，从第11孔吸取0.025mL弃去。
2.1.4 每孔加0.025mL PBS。
2.1.5 每孔加入0.025mL 1%（V/V）鸡红细胞悬液。
2.1.6 将反应板在振荡器上震荡1～2分钟或轻扣反应板混合反应物，在室温（20～25℃）下静置20～30分钟或2～8℃ 45～60分钟。在对照孔红细胞显著呈钮扣状时判定结果。
2.1.7 结果判定 将反应板倾斜60度，观察红细胞有无泪珠状流淌，完全无泪珠样流淌(100%凝集)的最高稀释倍数为血凝效价。
2.2 血凝抑制（HI）试验
2.2.1 根据HA试验测定的效价，计算配制4个血凝单位(4HAU)抗原。HA效价除以4即为含4HAU抗原的稀释倍数。例如，HA效价为1:256，则4HAU抗原的稀释倍数应是1:64（256除以4）。
2.2.2 第1～11孔加入0.025mL PBS，第12孔加入0.05mL PBS。
2.2.3 第1孔加入0.025mL血清，充分混匀后吸0.025mL于第2孔，依次对倍稀释至第10孔，从第10孔吸取0.025mL弃去。
2.2.4 第1～11孔均加入0.025mL的4HAU抗原，在室温（20～25℃）下静置30分钟或2～8℃ 50分钟。
2.2.5 每孔加入0.025mL 1%（V/V）的鸡红细胞悬液，震荡混匀，在室温（20～25℃）下静置20～30分钟或2～8℃ 45～60分钟，对照红细胞将呈明显钮扣状沉于孔底。
3 结果判定 以完全抑制4 HAU抗原的最高血清稀释倍数判为该血清的HI效价。当阳性对照血清的HI效价与已知效价误差不超过1个滴度，阴性对照血清效价不高于21og2时，试验方可成立。被检血清HI效价≤31og2判为阴性；＝41og2判为可疑(可疑样品应重检，重检效价≥41og2判为阳性，≤31og2判为阴性)；≥51og2判为阳性.
【规格、贮藏及有效期】
50份/盒。试剂盒应-20℃保存，到用户手上有效期应≥12个月。
二、禽传染性贫血病抗体Elisa
*【作用与用途】 用于禽传染性贫血病抗体的检测。
*【试剂盒组成】
禽鸡贫血病病毒包被板 5块
抗-CAV单克隆抗体：(HRPO)酶标记物，含蛋白稳定剂的缓冲液 50ml
CAV阴性对照，稀释的无鸡贫血病病毒抗体鸡血清，叠氮钠防腐 2ml
CAV阳性对照，稀释的鸡抗CAV抗体，叠氮钠防腐
样品稀释缓冲液，叠氮钠防腐
10倍浓缩洗涤液：磷酸缓冲液，庆大霉素防腐
【操作步骤】
首先将试剂恢复到室温(18-25℃)并将其振摇混匀后再进行检测。
1.取出抗原包被板并在记录表上标记好被检样品的位置。
2.将100uL不需稀释的阴性对照加入A1孔和B1孔中。
3.将100uL不需稀释的阳性对照加入C1孔和D1孔中。
4.将100uL稀释的被检样品加入相应的孔。所有被检样品既可采用双孔测定又可采用单孔测定。
5.室温（18-25℃）孵育60分钟。
6.每孔加约350uL的稀释好的洗涤液进行洗板，共洗涤3-5次。
7.每孔加100uL的抗CAV的酶标记抗体（HRPO Conjugate)。 8.室温(18-25℃)下孵育30分钟。
9.重复第6步。
10.每孔加100uL的底物液(TMB Substrate)。室温(18-25℃)下孵育15分钟。
11.每孔加100uL的反应终止液(Stop Solution).
12.酶标仪空气调零,测定各孔于650nm波长处的吸光值A（650）。
结果
只有阴性对照光密度（650nm)平均值大于或等于0.600，阳性对照S/N值要小于或等于0.50， 该检测结果才能有效。若实验结果失败，有可能是实验操作失误造成，应按操作说明进行重复实 验。被检样品的鸡贫血病病毒(CAV)抗体是否存在主要由其测定值与阴性对照测定值的比值 (S/N)确定。
结果判定
S/N值大于0.6，判为阴性。
S/N值小于或等于0.6，判为阳性。
1： 100稀释
疫苗免疫后鸡群的免疫状态应通过监测并记录其代表性样本在一段疫苗起效时间内的抗体水平来评 估。根据结果可以评估抗体水平的分布及分析鸡群免疫状态的改变。
计算方法
1.阴性对照平均值（NCX）：
(A1孔（A650〉+B1孔（A650))/ 2 =NCX
2.阳性对照平均值（PCX）：
(C1孔（A650)+D1孔（A650))/2=PCX
3.S/N比值：
样品平均值（A650）/NCX=S/N
【贮藏及有效期】
试剂盒应4℃保存，到用户手上有效期应≥6个月。
三、禽白血病抗体Elisa
*【作用与用途】 用于禽白血病抗体的检测。
*【试剂盒组成】
数量
1. ALV-J gp85包被板 5块
2.ALV-J阳性对照，稀释的鸡抗抗体，叠氮钠防腐
3.ALV-J阴性对照，稀释的无抗体鸡血清，叠氮钠防腐 1.9ml
4.辣根过氧化物酶标记的（羊）抗鸡抗体，庆大霉素防腐 50ml
5.样品稀释液；蛋白质稳定剂缓冲液，叠氮钠防腐 235ml
6.TMB 底物液 60ml
7.终止液 60ml
8. 10X浓缩洗涤液 235ml
【操作步骤】
将试剂恢复至室温(18-25℃)，并将其振摇混匀后进行使用。
1.抗原包被板并在记录表上标记好被检样品的位置。
2.取100uL不需稀释的阴性对照液加入A1孔和B1孔中
3.取100uL不需稀释的阳性对照液加入C1孔和D1孔中。
4.取100uL稀释的被检样品液加入相应的孔中。所有被检样品既可采用双孔测定又可采用单孔 测定。
5.室温(18-25℃)下孵育30分钟(±2分钟)。
6.每孔加约350uL的稀释好的洗涤液进行洗板，洗3-5次，并将孔内液体完全吸干。
7.每孔加100uL的酶标羊抗鸡抗体（HRPO)。
8.室温(18-25℃)下孵育30分钟(±2分钟)。
9.重复第6步。
10.每孔加100uL的TMB底物液。
11.室温(18-25℃)下孵育15分钟(±1分钟)。
12.每孔加100uL的终止液。
13.测定并记录各孔于650nm波长的吸光值
只有阳性对照平均值和阴性对照平均值的差值大于0.100，阴性对照平均值小于或等于0.150， 该检测结果才能有效。如果试验无效，试验中的操作值得怀疑，试验应重做。检测样品中是否含 有禽白血病病毒J亚群（ALV-J）的抗体主要由该样的测定值与阳性对照平均值的比值决定。阳 性对照已进行标准化处理，其代表含有显著水平的抗禽白血病病毒J-亚群抗体。被检样品的抗体水平主要由其测定值与阳性对照测定值的比值(S/P)确定。
结果判定
S/P比值小于或等于0.6，判为阴性。
S/P值大于0.6，判为阳性，表明存在禽白血病病毒J亚群（ALV-J）抗体。 ALV-J抗体检测试剂盒被设计为用于检测病毒水平传播群体普查工具，它不能用于个体禽类 情况的评估。禽白血病病毒J亚群（ALV-J）抗体反应在不同品种（鸡）中有差异，并且内源性淋巴白血 病病毒也会对其产生影响。肉用型鸡禽白血病病毒J亚群（ALV-J）抗体检测不建议用于12-14 周龄以下的鸡群。阳性抗体检测结果表明曾感染过ALV-J，但并不能反映是否正在散播病毒。检测鸡群的状况应该包括病毒血症和/或病毒携带试验。
ALV-J垂直传递可导致子代免疫耐受，抗体检测表现为阴性。
计算
1. 阴性对照平均值(NCX)： A1孔（A650)+B1孔（A650)
NCX= 2
2. 阳性对照平均值（PCX): C1孔（A650)+D1孔（A650)
PCX= 2
3.S/P比值： 样品平均值-NCX
S/P= (PCX-NCX）
【贮藏及有效期】
试剂盒应4℃保存，到用户手上有效期应≥6个月。
四、禽网状内皮组织增生症Elisa
*【作用与用途】 用于禽网状内皮组织增生症抗体的检测。
*【试剂盒组成】
|
1.REV包被板 |
5 |
块 |
|
2.REV阳性对照，含：REV抗体，已经稀释，用叠氮化钠保护 |
1.9 |
|
|
3.REV阴性对照，不含：REV抗体，已经稀释，用叠氮化钠保护 |
1.9 |
|
|
酶标抗体，（山羊)抗鸡抗体-辣根过氧化物酶(HRPO)结合物，用庆大 霉素和凯松保护 |
50 |
|
|
5.样品稀释缓冲液，用叠氮化钠保护 |
235 |
|
|
6.TMB 底物 |
60 |
|
|
7.终止液 |
60 |
|
【操作步骤】
各组分放回温到室温（18-25℃），颠倒摇动混合均匀。
1.取出包被板，在表上记录样品位置。
2. 加100uL不需稀释的阴性对照血清至A1和B1孔。
3.加100uL不需稀释的阳性对照血清至C1和D1孔。
4.加100uL稀释好的样品至相应的孔。所有样品既可进行双孔检测也进行单孔检测。
5. 在室温(18-25℃)孵育30分钟(±2分钟）。
6.用大约350uL蒸馏水或去离子水洗涤微孔共3-5次，洗涤后将孔内液体完全吸干
7.每孔加入100uL酶标羊抗鸡抗体（HRPO)。
8. 在室温(18-25℃)孵育30分钟(±2分钟）。
9.重复步骤6。
10.每孔加100uL TMB底物溶液。
I. 在室温下孵育15分钟(±1分钟）。
12. 每孔加100uL终止液终止反应。
13. 在650nm,A(650)测量和记录吸光值。
试验有效性
只有在阳性对照孔所得的均值减去阴性对照孔所得值的均值(PCX-NCX)大于0.075时，阴性 对照孔所得值的均值小于或等于0.150时，测定结果才有效。REV抗体的存在与否由样品对阳性的 S/P值来决定。阳性对照是标准化的，代表鸡血清的有效抗体水平。样品抗体的相对水平由样品对 阳性的S/P比值来决定。终点滴度可以通过后面列出的关系式计算得出。
结果判定
样品的S/P值小于或等于0.5，判为阴性。样品的S/P值大于0.5 (滴度大于1076)，判为阳 性，表明已免疫过或感染过REV。每个实验室应建立独自的免疫的抗体滴度标准。此滴度是根据实验室目前对REO的检测方法和过去抗体反应两方面综合而定。
计算方法
1.阴性对照平均值（NCX）
2.阳性对照平均值（PCX）
A1孔A(650)十B1孔A(650)
|
3.S/P值 样品A(650)一NCX
------------------------------ =S/P
PCX-NCX
4.终点抗体滴度(1:500)与S/P的关系式：
Log10滴度=1.09 (Log10 S/P)十3.36 |
【贮藏及有效期】
试剂盒应4℃保存，到用户手上有效期应≥6个月。
五、蓝舌病Elisa盒
*【作用与用途】 用于蓝舌病抗体的检测。
|
成分 |
数量 |
保存及注意事项 |
|
包被的微量反应板 |
5 |
+5℃ （±3℃） |
|
浓缩（20X）的洗涤 液 |
1x100ml/瓶 |
十5℃（±3℃） |
|
稀释缓冲液2 淡绿色（稀释样品 用） |
1x120ml/瓶 |
十5℃（±3℃）●用前晃动摇匀 |
|
阳性对照(液体) 阴性对照（液体》 |
1x1ml/瓶 1x1ml/瓶 |
十5℃（±3℃） |
|
抗-单克隆酶标 抗体 |
1x4ml/瓶 |
十5℃（±3℃） ●稀释的酶标抗体不能够保存。 |
|
显色溶液2 (TMB) 即取即用 |
1X60ml/瓶 |
十5℃（±3℃） |
|
终止液（0.5M H2SO4
溶液） |
1x120ml/瓶 |
十5℃（±3℃）●为了方便需要时即时使用，此种试剂也可以在试剂瓶密封良好的 条件下于+21℃(±5℃)温度下保存1个月。 ●终止液在INSTITUT POURQUIER所有的试剂盒中都是一样的， |
*【试剂盒组成】
【操作步骤】
1）血清的处理（孵育）
对照和样品利用以下的方法进行5倍稀释（请见注意1和注意2）：
●加样
■每个孔中加入80uL稀释缓冲液2；
■在A1孔中加入20uL不经稀释的阳性对照血清；
■在B1和C1孔中加入20uL不经稀释的阴性对照（请见注意2和注意3）；
■其它孔中加入20uL待检样品（单孔检测即可）；
●轻轻晃动反应板，以充分混匀孔中内容物；
●盖上盖板〔盖子，铝箔膜或粘贴膜）；
●在21℃（±5℃）下孵育45分钟（±3分钟）。
注意：
1. 96孔每孔单独加样需要很长的时间。为了标准化样品的孵育时间，对照和样品可以提前放入U型底的96孔板中，这样就可以使用多道移液器实现快速加样。用稀释血清样品同样的稀释方式来稀释对照也是非常重要的。
2 在A1，B1和C1孔中，对照血清的位置不是最重要的，它们可以加到反应板的任何位置；在一块反应板中最好添 加重复的对照以确定OD平均值。推荐可以在反应板的中央部分加入一个阳性和一个阴性对照。
2〕加入酶标抗体
a.用1900ml的蒸馏水对20X浓缩洗涤液进行稀释，稀释完的溶液我们称之为洗涤溶液。在取出100ml20X浓缩洗涤液 进行稀释之前，一定要确保在+21℃（±5℃)出现的结晶溶解消失；
b.用洗涤溶液将酶标抗体进行20倍稀释；
c.直接加入（不用洗涤或倒空反应板）100uL舢的稀释后的酶标抗体到每个孔中；
d.盖上盖板(盖子，铝箔膜或粘贴膜),在21℃(±5℃)下孵育45分钟(±3分钟）。
3) 洗涤
a.倒空反应板中的内容物，或使用人工或自动化方法操作；
b.所有的孔中加入洗涤溶液，然后再次倒空板中的内容物；
C. 重复步骤b 2次（总共洗涤3次）。
注意：
1)最后洗涤一定要仔细，其洗涤效果对检测结果的好坏影响较大。
2)如果是人工操作在最后一次洗涤液后，将反应板扣拍到吸水材料上吸取残留的洗涤液以确保孔内再无内容物。 3)如果同时操作多块板，为了能够同步所有步骤，可以将孔内加入洗涤溶液然后放置长达1小时，不会改变结果的有效性。
4）显色
a.每个孔内加入100uL即取即用的显色溶液2(TMB);
b.在21℃(±5℃)下避光孵育10分钟；
C.每孔加入终止液100uL
d.轻轻晃动反应板直到颜色发展均匀化，仔细擦拭反应板底部。 注意：
1）当在我们实验室完成操作后，上述步骤所提到的10分钟显色时间会得到用于结果判定的O.D值。然而颜色显色 的程度还受到其它一些因素的影响(洗涤的效果，使用水的质量，加样的准确性，反应的温度等等）。考虑到工作条件的不尽相同，往往显色步骤后可能会得到高于或低于预期的结果。因而，操作人员可以根据实际情况 终止反应（ 10分钟±5分钟）； 2）终止显色以后，如果把反应板可以放置暗处，可以在1小时内读数。
5） 读数
a)在450nm波长处（OD.450)读数，读数之前，空气调零。
b)计算每个样品的00值与阴性对照的OD值的比值(S/N值）。这个值通过以下的方法获得： S/N%：（待检血清样品的OD450）/（阴性对照的OD450）X100
试验有效性
当满足以下标准时认为反应是有效的
● 阴性对照孔OD450必须大于等于0.700且小于等3.00；
● 阳性对照孔的S/N%小于20%。结果判定
1.样品的S/N%大于或等于80%。，判为阴性，没有产生抗BTV的特异性抗体； 2.样品的S/N%在70%-80%之间，判为可疑；
3.样品的S/N%小于或等于70%。，判为阳性，动物产生抗特异性抗体。注意：
S/N%处于可疑范围内的样品，建议重新采样或通过其它方法进一步确认。
总结
S/N% 判定
≥80% 阴性
70%-80% 可疑
≤70% 阳性
【贮藏及有效期】
试剂盒应4℃保存，到用户手上有效期应≥6个月。
八、禽流感A型普通RT-PCR
*【作用与用途】 用于禽流感A型核酸的检测。
*【试剂盒组成】
【操作步骤】
【贮藏及有效期】
试剂盒应-20℃保存，到用户手上有效期应≥6个月。
九、禽流感H9亚型普通RT-PCR
*【作用与用途】 用于禽流感H9亚型核酸的检测。
*【试剂盒组成】
【操作步骤】
【贮藏及有效期】
试剂盒应-20℃保存，到用户手上有效期应≥6个月。
十、禽流感H5亚型普通RT-PCR
*【作用与用途】 用于禽流感H5亚型型核酸的检测。
*【试剂盒组成】
【操作步骤】
【贮藏及有效期】
试剂盒应-20℃保存，到用户手上有效期应≥6个月。
十一、新城疫普通RT-PCR
*【作用与用途】 用于新城疫的检测。
*【试剂盒组成】
【操作步骤】
1 病毒RNA 的提取
1.1 取已处理的样品、阴性对照和阳性对照，分别加入裂解液600 μL，充分颠倒混匀，室温静置3～5 min。
1.2 将液体吸入吸附柱中（吸附柱要套上收集管，吸取液体时尽量不要吸到悬浮杂质，以免离心时堵塞
吸附柱），13000 rpm 离心30 s，弃去收集管中液体，套上收集管。
1.3 向吸附柱中加入600 μL 洗液，13000 rpm 离心30 s，弃去收集管中液体，套上收集管。
1.4 重复步骤1.3。
1.5 再空柱13000 rpm 离心2 min。
1.6 将吸附柱移入新的1.5 mL 离心管中，在膜中央加入洗脱液25 μL，室温静置1 min，13000 rpm 离
心30 s，获得总RNA。
2 RT-PCR 操作程序
每份总体积20 μL，含16.8 μL RT-PCR 反应液（用前混匀），1.2 μL 酶混合液，2 μL 模板RNA。
例如：n 份样品（n<10），配制n+1 份，16.8×（n+1）RT-PCR 反应液，再加入1.2×（n+1）酶混
合液混匀，取18 μL 分装成n 份，分别加入2 μL 模板RNA，加入矿物油20 μL 覆盖（有热盖的PCR
扩增仪不用加矿物油），作好标记。
在PCR 扩增仪上进行以下程序：42 ℃ 45 min，94 ℃ 3 min ；扩增条件为94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，
72 ℃ 30 s，35 个循环；72℃延伸5 min。
3 电泳
称3 g 琼脂糖放于500 mL 锥形瓶中，加入50 倍稀释的TAE 电泳缓冲液200 mL（取4 mL 50 倍TAE
电泳缓冲液，用双蒸水稀释至200 mL），于微波炉中熔解，再加入10 μL 染色液混匀。在电泳槽内放
好梳子，倒入琼脂糖凝胶，待凝固后将PCR 扩增产物10μL 混合2 μL 上样缓冲液，点样于琼脂糖凝胶
孔中，以110～120V 电压于50 倍稀释的TAE 电泳缓冲液中电泳，紫外灯下观察结果。
结果判定
阳性对照出现362 bp 扩增带、阴性对照无带出现（引物带除外）时，实验结果成立。被检样品出
现362 bp 扩增带为新城疫病毒阳性，否则为阴性。
【贮藏及有效期】
试剂盒应-20℃保存，到用户手上有效期应≥6个月。
注：
1、中标方应提供产品的原厂证明或生产厂家供货确认函、出厂检验报告或合格证书；
2、在保质期内，须按合同条款提供免费服务，非因操作不当造成试剂损坏由中标人负责包换。 |
